Der EUROASSAY: Eine neue Technik zur Erstellung von Antikörper-Profilen

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Testprinzip

Als Antigen-haltige Festphase werden Membranstreifen mit mehreren aufgereinigten, biochemisch charakterisierten Antigenen verwendet, die als dünne parallele Linien aufgetragen sind. Die Membranen sind als BIOCHIPs an Objektträgern fixiert.
Im ersten Inkubationsschritt binden sich bei positiven Proben die nachzuweisenden Antikörper aus dem verdünnten Patientenserum an die Festphasen-gebundenen Antigene.
Im zweiten Inkubationsschritt reagieren diese Antikörper mit alkalische-Phosphatase-markierten Anti-Human-Antikörpern.
Im dritten Inkubationsschritt werden die gebundenen Antikörper durch eine Farbreaktion mit einer Chromogen-/Substratlösung sichtbar gemacht. Sind spezifische Antikörper im Serum des Patienten vorhanden, erscheint eine dunkle Linie an der jeweiligen Antigen-Position.
Die Inkubation der Objektträger erfolgt mit der TITERPLANE®-Technik: Proben und Reagenzlösungen werden auf Reagenzträger getropft, die Objektträger werden anschließend von oben auf die Reagenzträger gelegt, so dass die BIOCHIPs in die Tropfen tauchen.
Entsprechend den eingesetzten Antigenen können mehrere Antikörper simultan in ein und demselben Testansatz analysiert werden.

Mit einem Objektträger können mehrere Patientenseren gleichzeitig nebeneinander untersucht werden.
Gesamtdauer der Analyse etwa 100 Minuten. Bereits während des Waschvorgangs werden die Reagenzien für den nächsten Inkubationsschritt auf Reagenzträger getropft.
Alle Inkubationsschritte laufen bei Raumtemperatur ab. Das Schütteln der Objektträger zusammen mit dem Reagenzträger auf einem Rotationsschüttler bringt die optimale Sensitivität.
Geringer Reagenzienverbrauch: Jeweils 50 µl Serumverdünnung oder Reagenzlösung pro Auftragestelle sind nötig.
Gebrauchsfertige Reagenzien (Waschpuffer: Konzentrat).

: EUROASSAY Anti-ENA ProfilPlus: Nachweis von Antikörpern gegen SS-A und SS-B bei Sjögren-Syndrom

Das Ergebnis wird visuell beurteilt: Es fallen keine Investitionskosten für Photometer o. ä. an.
Die Antigen-Linien befinden sich an genau definierten Positionen. Die Auswertung ist dadurch deutlich einfacher als bei Westernblots.
Auf jedem Testfeld wird die korrekte Durchführung der einzelnen Inkubationsschritte durch die Anfärbung der Kontrollbande signalisiert.
Positive und negative Resultate lassen sich einfach und sicher voneinander unterscheiden. Die Intensität der Banden korreliert weitgehend mit dem Antikörpertiter.
Als Antigene kommen aufgereinigte, meist affinitäts-chromatographisch isolierte Antigene zum Einsatz. Auf den Membranstreifen sind keine überflüssigen Proteine vorhanden, die zu unspezifisch positiven Resultaten führen könnten.
Die inkubierten Objektträger können über längere Zeit archiviert werden, die Ergebnisse lassen sich einfach dokumentieren.

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